リプリシーケンス
リプリシーケンス
Repli-Seqは、6つの細胞サイクルフェーズのそれぞれにおいて、全ゲノムにわたる初期のDNA複製鎖のシーケンスをマッピングします。これは、ブロモウリジン三リン酸（BrdU）培地で細胞を増殖させ、チミジンを置換することで達成されます。次に、蛍光活性化細胞選別（FACS）を用いて、細胞を細胞分裂における現在の状態に選別します。BrdU標識DNA鎖は、磁気ビーズ上の抗BrdU抗体によって免疫沈降されます。これらの免疫沈降鎖は、TruSeq DNAライブラリー調製プロトコールに従ってシーケンス用に調製できます。
長所：
- 新しく複製されたDNAのシーケンスを細胞分裂のフェーズにマッピング
- 必要なサンプル量が少ない（5,000細胞）ため、希少細胞集団の研究に適しています
- 合理化されたDNAライブラリー調製ステップ
短所：
- BrdUラベリング要件は、培養細胞に対するこのアプローチを制限します