SMORE-Seq

snRNA-Seq

snRNA-Seqは、軽度で迅速な核解離プロトコールを使用して、核内のRNAを分離しシーケンスします。この方法は、特に即時早期遺伝子(IEG)の挙動を研究する際に、一般的な解離プロトコールから生じる可能性のある技術的な問題を最小限に抑えます。

この方法では、細胞懸濁液は穏やかに溶解され、核は遠心分離によって細胞質溶解物から分離されます。FACSを使用して、単一細胞/核を個々のウェルに分類します。個々の核は、細胞捕捉と反応ケミストリーを実行するマイクロ流体支援装置を使用して増幅されます。Nextera XT DNA Library Prep Kitを使用して、核RNA内容物をcDNAライブラリーに処理します。磁気ビーズを用いて、40のサンプルのプールを採取し、精製します。cDNAライブラリーはシーケンスの準備ができました。

同様の方法:Div-Seq、Nuc-seq。

長所:
  • 迅速な解離プロトコールにより、プロテアーゼ消化、加熱、細胞質リボソームによるスプリアス遺伝子発現に起因する技術的問題を防止
  • プロテアーゼ解離ステップ中に一般的に発生する樹状突起の喪失を防ぎます
短所:
  • 未報告