STRT

STRT

STRT-Seqは、CEL-Seqに似た手法で、限られた物質でサンプルの課題を克服するための独自のバーコードとサンプルプーリングが含まれます。、この方法では、最初に個々のチューブに単一細胞をピッキングし、そこでオリゴ(dT)プライマーと3~6個のシトシンを添加して、一本鎖cDNA合成を行います。ヘルパーオリゴヌクレオチドはテンプレートの切り替えを促進し、バーコードをcDNAに導入します。バーコード化されたcDNAは、シングルプライマーPCRによって増幅されます。ディープシーケンスにより、個々の細胞の正確なトランスクリプトーム決定が可能になります。

長所:
  • バーコード化とプーリングにより、一度に多数の異なる単一細胞をマルチプレックス化して研究することができます
  • サンプルの取り扱いとクロスコンタミネーションの可能性は、1セルにつき1本のチューブを使用するため、大幅に減少します
短所:
  • PCRバイアスはGCリッチテンプレートを過小評価する可能性がある
  • 非線形PCR増幅は、再現性に影響を与えるバイアスにつながる可能性があります
  • ポリメラーゼによって引き起こされる増幅エラーは、誤って表され、シーケンスされます
  • PCRバイアスによる精度の低下
  • 500 bp未満のターゲットは、PCR中にポリメラーゼによって優先的に増幅されます
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