NGSワークフローステップ

NGSワークフローのシーケンスステップでは、ライブラリーがフローセルにロードされ、シーケンサーに配置されます。DNA断片のクラスターがクラスター形成と呼ばれるプロセスで増幅され、何百万もの一本鎖DNAのコピーが生まれます。クラスター形成は、イルミナシーケンス装置の大半で自動的に行われます。

Sequence by Synthesis（SBS）と呼ばれるプロセスで、化学修飾されたヌクレオチドは自然相補性を介してDNAテンプレート鎖に結合します。各ヌクレオチドには蛍光タグと可逆的ターミネーターが含まれており、次の塩基の取り込みを阻止します。蛍光シグナルはどのヌクレオチドが添加されたかを示し、次の塩基が結合できるようにターミネーターが開裂します。

DNAの順鎖を読み取った後、リードが洗浄され、逆鎖に対してプロセスが繰り返されます。この手法はペアエンドシーケンスと呼ばれます。

シーケンス後、装置ソフトウェアはヌクレオチド（ベースコーリングと呼ばれるプロセス）とそのベースコールの予測精度を同定します。データ解析中に、シーケンスデータを標準解析ツールにインポートしたり、独自のパイプラインを設定したりできます。

今では、直感的なデータ解析アプリを使用して、バイオインフォマティクストレーニングやラボスタッフを追加することなく、NGSデータを解析することができるようになりました。これらのツールにより、シーケンスアライメント、バリアントコーリング、データ可視化、または解釈が得られます。