G&T-Seq

G &T-Seq

G&T-Seqは、単一細胞からゲノムDNAと全長mRNAを分離しシーケンスすることができます。この方法では、単一細胞を単離し、溶解します。RNAは、ビオチン化オリゴ(dT)キャプチャープライマーを使用してキャプチャーし、ストレプトアビジンでコーティングされた磁気ビーズを使用してDNAから分離します。Smart-seq2はビーズ上のキャプチャーされたRNAを増幅するために使用され、マルチディスプレイスメント増幅(MDA)はDNAの増幅に使用されます。シーケンス後、DNAシーケンスとRNAシーケンスを統合することで、単一細胞の遺伝子発現プロファイルに対する洞察が得られます。

長所:
  • あらゆる全ゲノム増幅法に対応
  • 完全長転写産物がキャプチャされるため、シーケンスリードに3'末端バイアスなし
  • DNAとRNAは物理的に分離され、独立して増幅されるため、解析中にコーディングシーケンスをマスクする必要はありません
短所:
  • DNAとRNAの物理的分離は、サンプルの損失や汚染のリスクを高める可能性があります
  • DNAとRNAの物理的分離により処理時間が増加